TINCIÓN DE GRAM

La tinción de Gram es uno de los métodos de tinción más importantes usados en el laboratorio bacteriológico y microbiológico para el examen directo de gran variedad de géneros bacterianos razón por la cual, se debe estar perfectamente familiarizado. Su utilidad práctica es indiscutible

 Y en el trabajo microscópico rutinario de microbiología las referencias a la morfología celular bacteriana como: cocos, bacilos, positivos, negativos, etc. se basan justamente en la tinción de Gram.

                Esta tinción se denomina así en honor al bacteriólogo danés Christian Gram, quien la desarrolló en 1844. Sobre las bases de su reacción, clasificó las bacterias en dos grandes grupos: las Grampositivas, que retienen el colorante primario (cristal violeta) y se observan de color azul obscuro o púrpura y las Gramnegativas, que son decoloradas, esto es que pierden el colorante primario y subsecuentemente toman el colorante de contraste safranina observándose de color rojo o rosa. 

En este caso los términos positivo y negativo no tienen nada que ven con carga eléctricas, sino simplemente designan dos grupos morfológicos distintos de bacterias.

Preparación del frotis:

·         Tome un portaobjetos y limpie con papel absorbente una de sus caras a fin de eliminar la grasa.

·         Marque en el reverso de la lámina un área ovalada aprox. de 1cm de diámetro y 2cm de largo y en el borde el número y tipo de muestra.

·         Gire la lámina y coloque una gotita de solución salina estéril sobre el área circular marcada al reverso de la lámina.

·         Con un aplicador de madera tome una colonia a partir del microorganismo a estudiar. Los frotis delgados son los mejores resultados.

·         Fíjela al calor, pasándola ligeramente por la llama, no calentar excesivamente. Una buena indicación del grado de calentamiento, es que al tocar el reverso de la lámina con su mano no debe quemarse

·         Coloque la lámina en el puente de tinción

Técnica de tinción:

·         Colóquese los guantes y ubicar las láminas extendidas y fijarlas en una bandeja adecuada y cubrir su superficie con cristal violeta por un minuto. Lavar con agua destilada y escurrir,

·         Cubra la superficie de la lámina con la solución de Lugol por un minuto. Lavar con agua destilada y escurrir

·         Decolorar con Alcohol-acetona hasta que los bordes del frotis no desprenda más color azul (30 segundos). Lavar con agua destilada y escurrir.

·         Nota: Este es el paso más importante de la coloración ya que una excesiva adición del alcohol-acetona permite la salida del colorante primario de las células grampositivas.

·         Cubrir las láminas con safranina por 1 minuto. Lavar con agua destilada, escurrir y dejar secar a temperatura ambiente.

Observación  bajo el microscopio

La tinción de Gram aporta dos ideas básicas para la identificación “taxonómica” de las bacterias: la primera es el color que adquieren tras la tinción y la segunda es la forma que presentan las células bacterianas.

·         Colocar una gota de aceite de inmersión sobre las láminas teñidas y secas, examinaras bajo un microscopio de luz, utilizando el objetivo de inmersión (100X)

·         Observar varios campos hasta encontrar aquel, donde las células están adecuadamente separadas, para permitir la visualización de la morfología